实验室常用消毒与灭菌技术

一、消毒技术

（一）明确消毒的主要对象

应具体分析引起***的途径、涉及的媒介物及病原微生物的种类，有针对性地使用***。

（二）采取适当的消毒方法

根据消毒对象选择简便、有效、不损坏物品、来源丰富、价格适中的消毒方法。

***诊疗器械按污染后可造成的危害程度和在***接触部位不同分为三类：

1. 高度***的器材

穿过皮肤、粘膜而进入无菌的***或***内部，或与破损的皮肤粘膜密切接触的器材，如***器械、***器、心脏起搏器等。必须选用***消毒法（灭菌）。

2. 中度***的器材

仅与皮肤、粘膜密切接触，而不进入无菌***内，如内窥镜、体温计、氧气管、呼吸机及所属器械、***器械等。应选用中效消毒法，杀灭除芽胞以外的各种微生物。

3. 低度***器材和物品

不进入******，不接触粘膜，仅直接或间接地与健康无损的皮肤接触，如果没有足够数量的病原微生物污染，一般并无危害，如口罩、衣被、药杯等，应选用低效消毒法或只作一般卫生处理。只要求去除一般***繁殖体和亲脂病毒。

（三）控制影响消毒效果的因素 许多因素会影响***的作用，而且各种***对这些因素的敏***差异很大。

1. 微生物的种类

不同类型的病原微生物对***抵抗力不同，因此，进行消毒时必须区别对待。

（1）***繁殖体

易被***消灭，一般革蓝氏阳性***对***较敏感，革蓝氏阴性***则常有较强的抵抗力。繁殖体对热敏感，消毒方法以热力消毒为主。

（2）***芽胞

芽胞对消毒因子耐力***强，杀灭***芽胞***可靠的方法是热力灭菌，电离辐射和***熏蒸法。在化学***中，***、***能杀灭芽胞，但可靠性不如热力灭菌法。

（3）病毒

对消毒因子的耐力因种类不同而有很大差异，亲水病毒的耐力较亲脂病毒强。

（4）***

对干燥、日光、紫外线以及多数化学***耐力较强，但不耐热（60℃1小时杀灭）。

2. 微生物的数量

污染的微生物数量越多需要消毒的时间就越长，剂量越大。

3. 有机物的存在

①有机物在微生物的表面形成保护层妨碍***与微生物的接触或延迟***的作用，以致于微生物逐渐产生对***的适应性。②有机物和***作用，形成溶解度比原来更低或杀菌作用比原来更弱的化合物。③一部分***与有机物发生了作用，则对微生物的作用浓度降低。④有机物可中和一部分***。***中***类、表面活化剂等受有机物影响较大，对***影响较小。

4. 温度

随着温度的升高，杀菌作用增强，但温度的变化对各种***影响不同。如甲醛、***、***的湿度升高1倍时，杀菌效果可增加10倍。而酚类和酒精受温度影响小。

5. PH值

从两方面影响杀菌作用。①对***的作用：改变其溶解度和分子结构。②pH过高或过低对微生物的生长均有影响。在酸性条件下，***表面负电荷减少，阴离子型***杀菌效果好。在碱性条件下，***表面负电荷增多，有利于阳离子型***发挥作用。

6. 处理剂量与监测

保证消毒、灭菌处理的剂量，加***果监测，防止再污染。
 

二、灭菌技术

（一）高压蒸汽灭菌法的注意事项

***，无菌包不宜过大（小于50cm×30cm×30cm），不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹***。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。

第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹***，严重影响灭菌效果。

第三，定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。

高压蒸汽灭菌效果的监测：有以下三种方法：

***种是工艺监测，又称程序监测。根据安装在灭菌器上的量器（压力表、温度表、计时表）、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行

第二种是化学指示监测。利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数。常用的有：(

自制测温管：将某些化学***的晶体密封于小玻璃管内（长2cm,内径1~2mm）制成。常用***有苯甲酸（熔点121-123℃）等。灭菌时，当湿度上升至***的熔点，管内的晶体即熔化，事后，虽冷却再凝固，其外形仍可与未熔化的晶体相区别，此法只能指示温度，不能指示热持续时间是否已达标，因此是***低标准。主要用于各物品包装的中心情况的监测。

M压力灭菌指示胶带：此胶带上印有斜形白色指示线条图案，是一种贴在待灭菌的无菌包外的***变色胶纸。其粘贴面可牢固地封闭敷料包、金属盒或玻璃物品，在121℃经20分钟，130℃经4分钟后，胶带100%变色（条纹图案即显现黑色斜条）。3M胶带既可用于物品包装表面情况的监测，又可用于对包装中心情况的监测，还可以代替别针，夹子或带子使用。

第三种是生物指示剂监测。利用耐热的非致病性***芽胞作指示菌，以测定热力灭菌的效果。***用嗜热脂肪***，本菌芽胞对热的抗力较强，其热***时间与病原微生物中抗力***强的肉毒***芽胞相似。生物指示剂有芽胞悬液、芽胞菌片以及菌片与培养基混装的指示管。检测时应使用标准试验包，每个包中心部位置生物指示剂2个，放在灭菌柜室的5个点，即上、中层的***各一个点，下层的前、中、后各一个点。灭菌后，取出生物指示剂，接种于******紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，置55-60℃温箱中培养48小时至7天，观察***终结果。若培养后颜色未变，澄清透明，说明芽胞已被杀灭。达到了灭菌要求。若变为***混浊，说芽胞未被杀灭，灭菌失败。

（二）干热灭菌法

干热灭菌比湿热灭菌需要更高的温度与较长的时间。

（1）干烤：利用干烤箱，加热160~180℃2小时，可***一切微生物，包括芽胞菌。主要用于玻璃器皿、瓷器等的灭菌。

（2）烧灼和焚烧：烧灼是直接用火焰***微生物，适用于微生物实验室的接种针等不怕热的金属器材的灭菌。焚烧是彻底的消毒方法，但只限于处理废弃的污染物品，如无用的衣物、纸张、垃圾等。焚烧应在专用的焚烧炉内进行。

（3） 红外线：红外线辐射是一种0.77~1000微米波长的电磁波，有较好的热效应，尤以1~10微米波长的热效应***强。亦被认为一种干热灭菌。红外线由红外线灯泡产生，不需要经空气传导，所以加热速度快，但热效应只能在照射到的表面产生，因此不能使一个物体的前后左右均匀加热。红外线的杀菌作用与干热相似，利用红外线烤箱灭菌的所需温度和时间亦同于干烤。多用于***器械的灭菌。

人受红外线照射较长会感觉眼睛疲劳及头疼；长期照射会造成眼内损伤。因此，工作人至少应戴能防红外线伤害的防护镜。
 

（4）微波：微波是一种波长为1毫米到1米左右的电磁波，频率较高，可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。微波能使介质内杂乱无章的极性分子在微波场的作用下，按波的频率往返运动，互相冲撞和磨擦而产生热，介质的温度可随之升高，因而在较低的温度下能起到消毒作用。一般认为其杀菌机理除热效应以外，还有电磁共振效应，场致力效应等的作用。消毒中常用的微波有2450MHZ与915MHZ两种。微波照射多用于食品加工。在***中可用于检验室用品、非金属器械、无菌病室的食品食具、药杯及其它用品的消毒。

微波长期照射可引起眼睛的晶状混浊、***损伤和***功能紊乱等全身性反应，因此必须关好门后才开始操作。

（三）湿热灭菌法

在同样的温度下，温热的杀菌效果比干热好，其原因有：①蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量愈大，发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分，因较大同一温度的干热空气中易于凝固。②温热灭菌过程中蒸气放出大量潜热，加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所要温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。③湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好。

湿热灭菌法包括有：

（1）煮沸法：煮沸100℃，5分钟，能***一般***的繁殖体。许多芽胞需经煮潮5~6小时才***。水中加入2%碳酸钠，可提高其沸点达105℃。既可促进芽胞的杀灭，又能防止金属器皿生锈。煮沸法可用于饮水和一般器械（刀剪、***器等）的消毒。

（2）流通蒸汽灭菌法：利用100℃左右的水蒸汽进行消毒，一般采用流通蒸汽灭菌器（其原理相当于我国的蒸笼），加热15到39分钟，可******繁殖体。消毒物品的包装不宜过大、过紧以利于蒸汽穿透。(

（3）间歇灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽，以达到灭菌的目的。一般用流通蒸汽灭菌器，100℃加热15~30分钟，可***其中的繁殖体；但芽胞尚有残存。取出后放37℃孵箱过夜，使芽胞发育成繁殖体，次日再蒸一次，如此连续三次以上。本法适用于不耐高温的营养物（如***培养基）的灭菌。

（4）巴氏消毒法（Pasteurization）：利用热力***液体中的病原菌或一般的杂菌，同时不致严重损害其质量的消耗方法。由巴斯德创用以消毒酒精类，故名。加温61.1~62.8℃半小时，或71.7℃15~30秒钟。常用于消毒牛奶和酒类等。

（5）高压蒸汽灭菌法：压力蒸汽灭菌是在专门的压力蒸汽灭菌器中进行的，是热力灭菌中使用***普遍、效果***可靠的一种方法。其优点是穿透力强，灭菌效果可靠，能杀灭所有微生物。

目前使用的压力灭菌器可分为两类：下排气式压力灭菌器和预真空压力灭菌器。适用于耐高温、耐水物品的灭菌

（四）化学消毒灭菌法

利用化学***渗透***的体内，使菌体蛋白凝固变性，干忧***酶的活性，******代谢和生长或损害细胞膜的结构，改变其渗透性，***其生理功能等，从而起到消毒灭菌作用。所用的***称化学***。有的***杀灭微生物的能力较强，可以达到灭菌，又称为灭菌剂。

凡不适于物理消毒灭菌而耐潮湿的物品，如锐利的金属、刀、剪、缝针和光学仪器（胃镜、膀胱镜等）及皮肤、粘膜，***的分泌物、排泄物、病室空气等均可采用此法。

1. 化学消毒灭菌剂的使用原则

（1）根据物品的性能及病原体的特性，选择合适的***。

（2）严格掌握***的有效浓度、消毒时间和使用方法。

（3）需消毒的物品应洗净擦干，浸泡时打开轴节，将物品浸没于溶液里。
 

（4）***应定期更换，挥发剂应加盖并定期测定比重，及时调整浓度。

（5）浸泡过的物品，使用前需用无菌等渗盐水冲洗，以免***刺激******。

2.常用化学消毒灭菌方法

（1）浸泡法 选用杀菌谱广、腐蚀性弱、水溶性***，将物品浸没于***内，在标准的浓度和时间内，达到消毒灭菌目的。

（2）擦拭法 选用易溶于水、穿透性强的***，擦拭物品表面，在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。

（3）薰蒸法 加热或加入氧化剂，使***呈气体，在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。

适用于室内物品及空气消毒或精密贵重仪器和不能蒸、煮、浸泡的物品（***、***以及******用过的票证等），均可用此法消毒。

①纯乳酸 常用于***室和病室空气消毒。每100m2空间用乳酸12ml加等量水，放入***碗内，密闭门窗，加热熏蒸，待蒸发完毕，移去热源，继续封闭2小时，随后开窗通风换气。

②食醋 5-10ml/m3加热水1-2m3，闭门加热熏蒸到食醋蒸发完为止。因食醋含5%醋酸可改变***酸碱环境而有抑菌作用，对***、***病室的空气可进行消毒。

此外，尚可应用甲醛或***等进行熏蒸灭菌。

（4）喷雾法

借助普通喷雾器或气溶胶喷雾器，使***产生微粒气雾弥散在空间，进行空气和物品表面的消毒。如用1%漂***澄清液或0.2%***溶液作空气喷雾。对***芽胞污染的表面，每立方米喷雾2%***溶液8ml经30分钟（在18℃以上的室温下），可达99.9%杀灭率。

（5）***气体密闭消毒法 将***气体置于密闭容器内，在标准的浓度、湿度和时间内达到消毒灭菌目的。

***是广谱气体杀菌剂，能杀灭***繁殖体及芽胞，以及***和病毒等。穿透力强，对大多数物品无损害，消毒后可迅速挥发，特别适用于不耐高热和温热的物品，如精密器械、电子仪器、光学仪器、心肺机、起博器、书籍文件等，均无损害和腐蚀等***。本品沸点为10.8℃， 只能灌装于耐压金属罐或***安瓿中。

操作方法：

灭菌可用柜室法或丁基橡胶袋法。

①柜室法 可在***灭菌柜内进行。将物品放入柜室内，关闭柜门，预温加热至40-60℃，抽真空至21kPa左右，通入***，用量1kg/m3，在***适相对温度（60-80%）情况下作用6-12小时。灭菌完毕后排气打开柜门，取出物品。

②丁基橡胶袋法 在***的袋内进行。将物品放入袋内，挤出空气，扎紧袋口。***给药可事先放安瓿于袋内，扎紧袋口后打碎，使其气体扩散；亦可将钢瓶放在40-50℃温水中气化后与袋底部胶管相通，使气体迅速进入，用药量为2.5g/L。将橡胶袋底部通气口关闭，放入20-30℃室温中放置8-24小时。(

注意事项

①***应存放在阴凉、通风、无火源、无电开关处。用时轻取轻放，勿猛烈碰撞。②消毒时，应注意环境的相对湿度和温度。钢瓶需加温时，热水不可超过70℃。③消毒容器不能漏气（检测有无漏气，可用浸有******钠指示剂的滤纸片贴于***部位。如有漏气，滤纸片由白色变粉红色）。袋内物品放置不宜过紧。④***有一定吸附作用，消毒后的物品，应放置在通风环境，待气体散发后再使用。⑤本品液体对皮肤、眼及粘膜刺激性强，如有接触，立即用水冲洗。⑥在***消毒的操作过程中，如有头昏***等***症状时，应立即离开现场，至通风良好处休息。